総合診断実習　感染・血液―細菌検査 I. 細菌検査の報告書を見るときに考慮すべき事項 A. 病巣にいる細菌はすべて検体に含まれているか･適切な検体採取法 B. 病巣にいない細菌が検体に紛れ込むことはないか･コンタミネーション C. 検体の中にいる細菌はすべて塗抹鏡検で検出できるか･検体からの標本の取り方･存在密度･形態・染色態度 D. 検体の中にいる細菌はすべて分離培養で検出できるか･接種までの検体の保存条件･白血球・抗生物質の攻撃･検体からの標本の取り方･塗抹方法･培地・培養条件・培養期間（特殊培地は提出医の指示が必要） E. 分離培養で増殖した細菌はすべて同定検査の対象となるか･コロニーの性状で常在細菌叢と判断･分離培地上のコロニーの性状と数でコンタミネーションと判断 F. 同定された細菌はすべて感受性検査の対象となるか･菌名で常在細菌叢と判断･菌名と分離培地上のコロニーの数でコンタミネーションと判断 G. 感受性検査の結果は実際の薬効と等しいか･真の起炎病原体･真の起炎菌株･投与薬剤の病巣への移行･投与薬剤の生体内代謝･生体内での感受性･医原性異常細菌叢･菌交代･宿主の免疫力 II. 参照ホームページ A. 指導要領を含む教育用資料のページ→http://mn.umin.ac.jp/education.html B. 形態検査インターネットサーベイ研究班のページ→http://survey.umin.ac.jp/ C. 佐賀医大感染症情報室→http://www.icl.hsp.saga-med.ac.jp/ D. 臨床検査のページ→http://clin-lab.umin.ac.jp/ III. 細菌検査実習 A. グラム染色（実施）･課題：それぞれGPC／GNC／GPR／GNRのどれが見えるか･検体：［A-1］痰（No.　　）／［A-2］尿（No.　　）（検査申込状況により検体数は異なる）改良法のキットなので操作法は標準法と少し異なる 1. 検体をよく洗浄したスライドグラス上に塗布し、乾燥後火炎固定 2. 染色液Aをスライドグラス全面が被われるよう滴下、１分間静置し染色 3. 水道水で穏やかに水洗 4. 水をよく切った後脱色液を染色液Aの青い色素が溶け出さなくなるまで滴下 5. 水道水で十分に水洗 6. 染色液B-Fをスライドグラス全面が被われるように滴下、１分間静置し染色 7. 水道水で穏やかに水洗、ろ紙に載せて乾燥後、鏡検･コツ･塗布濃度を変えて数枚作る･尿は先が輪になったスティックメートを使い沈澱を取る･痰は膿の部分から取り水で薄めて広げる･火炎固定・水洗時はピンセットを使う･脱色液は引火性があるので注意 B. 抗酸菌染色（供覧）･課題：抗酸菌は１視野に何個または何視野に１個見えるか･検体：［B-1］痰（No.　　）／［B-2］痰（No.　　） C. 分離培地の観察（供覧）･課題：それぞれの培地で何種類のコロニーが区別できるか･検体：［C-1］（No.　　）BTB・血液・チョコ　　　［C-2］（No.　　）BTB・血液・チョコ　　　［C-3］（No.　　）BTB・血液・チョコ　　　（検査申込状況により検体数や培地の組合せは異なる）･コロニーの大きさ（培地との適合性・密集度）･コロニーの性状（ラフ／スムース・扁平／水滴状・透明度・光沢・色素産生）･培地の変化（色調変化・溶血）･各培地に共通するコロニー、それぞれの培地にしかないコロニーが存在し得る D. 自己検体の観察（供覧）･課題１：それぞれの培地で何種類のコロニーが区別できるか･検体：［D-1］BTB／［D-2］血液･課題２：MRSAはどのように判定するか･検体：［D-3］MRSAスクリーニング培地･増殖しかつコロニー周囲の培地が僅かでも白濁したものをMRSAとして疑う E. 感染予防･白衣・手袋着用、長髪の処理･医療廃棄物専用ゴミ箱･手洗い･感染事故への対処